產(chǎn)品英文名稱：CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined
產(chǎn)品中文名稱：間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基CB031-0081

間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基是 為擴(kuò)增從骨髓、臍帶血或脂肪組織提取的人類間充質(zhì)干細(xì)胞（human mesenchymalstem cells, hMSC)而設(shè)計(jì)的無(wú)血清培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基化學(xué)成分明確，所有組分為化學(xué)合成或重組純化的蛋白，并且無(wú)異源蛋白，不含直接從任何動(dòng)物組織提取成份。因此它 不存在批間誤差和潛在的動(dòng)物源性病原體。如果配合使用特定的培養(yǎng)板（見(jiàn)下)，還可以省去鋪板的工序和時(shí)間，免去鋪板膠的費(fèi)用。

Excell CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined 的產(chǎn)品信息
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 450ml  2-8℃避光 可以保存6個(gè)月
添加物 50ml  -80℃避光，避免反復(fù)凍融可以保存 6個(gè)月

Excell CB031-0081 / Human MSC medium, chemically-defined 的使用方法
一 培養(yǎng)基配制：
1. 過(guò)夜2‐8°C解凍添加物。
2. 無(wú)菌條件下配制100ml間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清完全培養(yǎng)基。
3.如果需要也可加入抗菌素（自選)。
配制好的間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清完全培養(yǎng)液（包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基、添加物、谷氨酸鹽）2-8°C 避光保存，保存期1 個(gè)月。
二 培養(yǎng)基的使用：
培養(yǎng)于其它無(wú)血清或有血清培養(yǎng)基的MSCs 可以快捷方便地轉(zhuǎn)換到本品中培養(yǎng)。多數(shù)情況下，生長(zhǎng)狀態(tài)良好的MSCs直接換液為本品即可。個(gè)別情況下，可能需要逐步轉(zhuǎn)換，如按20%，40%，60%，80%，100%依次遞增，至最終完全使用本品。
三 hMSCs細(xì)胞的復(fù)蘇：
1.37°C水浴快速?gòu)?fù)蘇凍融細(xì)胞。
2.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無(wú)菌50ml離心管中。
3.逐滴向裝有1ml細(xì)胞液的離心管中加入10ml預(yù)先復(fù)溫的間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清完全培養(yǎng)基，注意邊加邊輕輕晃動(dòng)離心管。
4.將上述混合溶液轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)瓶或細(xì)胞培養(yǎng)板中。
5.在5%CO2，37°C培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6.培養(yǎng)24h，換液。
7.此后每隔2天換液，直到傳代培養(yǎng)。
四 傳代培養(yǎng)：
如果使用特定的細(xì)胞培養(yǎng)板，如BD PrimariaTM 系列產(chǎn)品或Corning CellBINDTM 系列產(chǎn)品，那么使用本產(chǎn)品培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞是不需要預(yù)先鋪板。傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板是否無(wú)需鋪板正在評(píng)估中。對(duì)于那些還沒(méi)有被評(píng)估的產(chǎn)品或不適用于不 預(yù)先鋪板工序的產(chǎn)品，推薦使用人纖維連接蛋白（Fibronectin)進(jìn)行鋪板。
1.在鏡下觀察（使用本產(chǎn)品或其它培養(yǎng)基)細(xì)胞，確定傳代的時(shí)間，推薦在細(xì)胞量達(dá)到70%滿的時(shí)候傳代，不要讓細(xì)胞超過(guò)80%滿！
2.預(yù)先將0.05%胰酶/0.53mM EDTA和間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清完全培養(yǎng)基復(fù)溫到37°C待用。
3.用移液槍吸走舊培養(yǎng)基。
4.用DPBS洗一遍（自選)。
5.加入0.05%胰酶/0.53mM EDTA液以覆蓋住細(xì)胞表面，推薦室溫消化細(xì)胞（消化液用量：6孔板每孔約10cm2加入0.5ml，25cm2培養(yǎng)板加入1ml)。
6. 鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)看見(jiàn)細(xì)胞開(kāi)始從培養(yǎng)板底脫離，輕輕敲擊培養(yǎng)板邊緣幫助細(xì)胞脫落。消化時(shí)間為1‐3分鐘。
7. 加入2倍于消化液體積的間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清完全培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液收集于15ml離心管中。
8.1200rpm離心10分鐘。
9.盡量棄去離心后的上層清液。用間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。此時(shí)可取細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
10.按照3-5X103/cm2密度接種細(xì)胞。
11.5%CO2，37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
12.每隔2天換新鮮的間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清完全培養(yǎng)基。
13.當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到70%滿時(shí)，傳代（一般每隔3-4天)。
五 凍存細(xì)胞：
1.配制細(xì)胞凍存液。
2.離心分離細(xì)胞，用凍存液重懸細(xì)胞。
3.將凍存管轉(zhuǎn)移到凍存盒中，置于-80°C冰箱過(guò)夜。
4.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中長(zhǎng)期貯存。

Excell 間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基CB031-0081 產(chǎn)品英文描述
Serum free medium for amplification of extracted from bone marrow, umbilical cord blood and adipose tissue of human mesenchymal stem cells, mesenchymal stem cells (human mesenchymalstem cells, hMSC) of serum free medium and design. The culture medium composition clearly, all components for chemical synthesis and purification of recombinant protein, and no heterologous protein, containing no ingredients directly from any animal tissue. Therefore, it does not exist between errors and the potential of animal pathogens. If used in conjunction with the culture plate specific (see below), but also can save time and planking, relieve the cost of glue.