在神經(jīng)科學研究中,如何準確識別和標記成熟神經(jīng)元,是理解神經(jīng)發(fā)育、環(huán)路功能及相關(guān)疾病機制的核心環(huán)節(jié)。NeuN(Neuronal Nuclei,神經(jīng)元核蛋白)作為一種DNA結(jié)合的神經(jīng)元特異性蛋白,廣泛表達于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的大多數(shù)成熟神經(jīng)元中,是區(qū)分神經(jīng)元與非神經(jīng)元細胞最具代表性的標志物。Merck-millipore 的 MAB377 抗NeuN抗體(克隆號 A60),正是這一領(lǐng)域應用最廣泛、驗證最充分的經(jīng)典工具。
一、產(chǎn)品概述
MAB377 是 Chemicon? 品牌旗下的一款小鼠單克隆抗NeuN抗體,克隆號為 A60,以純化免疫球蛋白形式提供。該抗體可特異性識別DNA結(jié)合的神經(jīng)元特異性蛋白NeuN,存在于所有被測脊椎動物的大多數(shù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元細胞中。MAB377 已發(fā)表并經(jīng)驗證可用于流式細胞術(shù)(FC)、免疫細胞化學(IC)、免疫熒光(IF)、免疫組織化學(IH)、石蠟包埋組織免疫組化(IH(P))、免疫沉淀(IP)以及Western Blot(WB)等多種實驗技術(shù),是神經(jīng)科學領(lǐng)域引用量極高的抗體之一,文獻引用超過2500篇。
該產(chǎn)品僅供研究使用,不適用于人體或診斷用途。
二、核心參數(shù)
| 參數(shù) | 規(guī)格 |
|---|---|
| 產(chǎn)品貨號 | MAB377 |
| 產(chǎn)品名稱 | Anti-NeuN Antibody, clone A60 |
| 品牌 | Merck-millipore(Chemicon?) |
| 克隆號 | A60 |
| 宿主 | 小鼠 |
| 抗體類型 | 單克隆抗體 |
| 免疫球蛋白亞型 | IgG1 |
| 抗體形式 | 純化免疫球蛋白(Protein A純化) |
| 免疫原 | 純化的小鼠腦細胞核 |
| 分子量 | 46/48 kDa |
| 種屬反應性 | 禽、雞、雪貂、人、小鼠、豬、大鼠、蠑螈 |
| 應用 | FC、IC、IF、IH、IH(P)、IP、WB |
| 濃度 | 1 mg/mL |
| 儲存溫度 | 2-8°C |
| 運輸條件 | 濕冰運輸 |
| RRID | AB_2298772 |
三、靶點概述:NeuN的生物學功能
NeuN 是一種DNA結(jié)合的神經(jīng)元特異性核蛋白,其分布明顯局限于胎兒和成人大腦中的神經(jīng)元細胞核、核周體以及部分近端神經(jīng)元突起。免疫組化染色主要位于神經(jīng)元細胞核,細胞質(zhì)染色較淺。強核染色提示NeuN可能具有核調(diào)節(jié)蛋白的功能。
值得注意的是,有少數(shù)神經(jīng)元類型在所有年齡段均不被NeuN識別,包括:INL視網(wǎng)膜細胞、Cajal-Retzius細胞、浦肯野細胞、下橄欖核和齒狀核神經(jīng)元以及交感神經(jīng)節(jié)細胞等。在發(fā)育過程中,NeuN的免疫反應性首先在神經(jīng)元發(fā)生有絲分裂后不久即可觀察到,增殖區(qū)未觀察到染色。免疫反應性在小鼠神經(jīng)管中約E9.5時出現(xiàn),至E12.5時廣泛分布于發(fā)育中的神經(jīng)系統(tǒng)。
四、技術(shù)驗證與數(shù)據(jù)
Western Blot 驗證
該抗體在Western Blot中可識別46-48 kDa范圍內(nèi)的2-3個條帶,可能在約66 kDa處識別出另一條帶。已有敲除驗證數(shù)據(jù)支持其特異性。
免疫組化驗證
在免疫組化應用中,推薦稀釋度為1:100-1:1,000。該抗體在聚酯蠟包埋組織上效果最佳,在石蠟包埋組織上以較低工作稀釋度同樣適用。該抗體與甲醛類固定劑兼容性良好,檸檬酸和微波預處理已成功應用。有獨立驗證數(shù)據(jù)顯示,該抗體在IHC中功能良好,已在人類和動物組織中驗證有效。
免疫細胞化學驗證
在免疫細胞化學中,推薦使用1:10-1:100稀釋度。培養(yǎng)的神經(jīng)元應使用0.1% Triton X-100進行透化處理。
文獻引用
該抗體在開放獲取文獻中已被提及超過1270次,總引用量超過2500篇。近期應用包括氫氣促進新生兒缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)保護研究、Raf-ERK信號動態(tài)調(diào)控神經(jīng)元活動研究以及小膠質(zhì)細胞VRK2調(diào)控丘腦星形膠質(zhì)細胞GABA合成研究等。
五、適用研究領(lǐng)域
MAB377 抗NeuN抗體適用于以下研究方向:
神經(jīng)元鑒定與標記:成熟神經(jīng)元的特異性識別,適用于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)各腦區(qū)
神經(jīng)發(fā)育研究:神經(jīng)元分化、成熟及遷移過程的研究
神經(jīng)環(huán)路與突觸研究:腦區(qū)神經(jīng)元定位及環(huán)路示蹤
神經(jīng)退行性疾病:阿爾茨海默病、帕金森病等疾病模型中神經(jīng)元丟失的評估
腦損傷與修復:創(chuàng)傷性腦損傷、腦缺血后神經(jīng)元存活分析
脊髓損傷研究:脊髓神經(jīng)元標記及損傷后修復評估
神經(jīng)移植研究:移植物中神經(jīng)元細胞的鑒定與追蹤
原代神經(jīng)元培養(yǎng):體外培養(yǎng)神經(jīng)元的鑒定與純度評估
六、使用說明
儲存與處理:
收到產(chǎn)品后于 2-8°C 儲存
自收之日起,2-8°C條件下可穩(wěn)定保存 6個月
產(chǎn)品為純化小鼠免疫球蛋白IgG1液體,緩沖液含0.02 M磷酸鹽緩沖液、0.25 M NaCl,pH 7.6,含0.1%疊氮化鈉
推薦工作稀釋度:
| 應用 | 推薦稀釋度 |
|---|---|
| Western Blot | 前一批次識別46-48 kDa范圍內(nèi)2-3個條帶 |
| 免疫細胞化學(IC) | 1:10 – 1:100 |
| 免疫組織化學(IH) | 1:100 – 1:1,000 |
| 免疫組化(石蠟切片) | 前一批次已驗證,最佳稀釋度由用戶確定 |
| 免疫熒光(IF) | 1:500(參考文獻數(shù)據(jù)) |
最佳工作稀釋度需由最終用戶根據(jù)自身實驗體系進行優(yōu)化確定。
陽性對照:腦組織。
陰性對照:非神經(jīng)元組織,如成纖維細胞。
注意事項:
培養(yǎng)的神經(jīng)元應使用0.1% Triton X-100進行透化處理
一抗稀釋應使用僅含緩沖液和一抗的簡單溶液,不含過多蛋白封閉劑或洗滌劑
雙標記研究中如使用小鼠單克隆抗體,建議順序孵育,MAB377最后加入
七、產(chǎn)品優(yōu)勢
? 經(jīng)典克隆,驗證充分
克隆號 A60 是NeuN抗體領(lǐng)域唯一的經(jīng)典克隆,自報道以來已在超過2500篇文獻中得到驗證,具有卓越的特異性和重復性。該抗體已在流式細胞術(shù)、免疫細胞化學、免疫熒光、免疫組化、免疫沉淀和Western Blot等多種平臺驗證。
? 種屬覆蓋廣泛
可識別禽、雞、雪貂、人、小鼠、豬、大鼠、蠑螈等多種屬的NeuN蛋白,為跨物種比較研究提供了便利。
? 多平臺兼容
同時適用于流式細胞術(shù)、免疫細胞化學、免疫熒光、免疫組織化學(包括石蠟切片和冰凍切片)、免疫沉淀和Western Blot,可滿足不同實驗設(shè)計的需求。
? 獨立驗證支持
該抗體已通過紐約大學Langone醫(yī)學中心的獨立驗證,確認在人類和動物組織中IHC功能良好。
? 文獻基礎(chǔ)深厚
超過2500篇同行評審文獻引用,涵蓋神經(jīng)科學研究的各個方向,為實驗數(shù)據(jù)的可靠性提供了堅實保障。
MAB377 抗NeuN抗體以其經(jīng)典克隆 A60 的卓越特異性、廣泛的種屬覆蓋和豐富的文獻驗證,成為神經(jīng)科學研究中成熟神經(jīng)元標記的可靠選擇。
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