細(xì)胞傳代是細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)操作，解離試劑直接決定細(xì)胞活力與后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。很多科研人員在做干細(xì)胞、流式樣本時(shí)，會(huì)尋找比胰酶更溫和的消化試劑，A6964-100ML Merck-sigma Accutase? 溶液就是廣受科研人員認(rèn)可的細(xì)胞脫壁試劑，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)，為實(shí)驗(yàn)室試劑采購(gòu)提供穩(wěn)定貨源。
?一、細(xì)胞解離試劑選型要點(diǎn)
- 細(xì)胞保護(hù)能力：敏感細(xì)胞、干細(xì)胞、原代細(xì)胞不能使用強(qiáng)消化試劑，需選擇低損傷配方，保護(hù)細(xì)胞表面蛋白。
- 組分純凈度：動(dòng)物源成分會(huì)引入未知雜質(zhì)，高標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)優(yōu)先選擇無(wú)動(dòng)物源試劑。
- 無(wú)菌質(zhì)控：細(xì)胞培養(yǎng)試劑必須無(wú)菌，低內(nèi)毒素，避免微生物污染影響細(xì)胞生長(zhǎng)。
- 使用便捷性：優(yōu)先選擇即用型成品試劑，省去配制、過(guò)濾滅菌的人工成本。
- 適用性：試劑需要適配多種細(xì)胞類型，同時(shí)兼容普通培養(yǎng)板與包被型培養(yǎng)載體。
?二、A6964 Accutase? 溶液 適配高標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需求
A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液是成熟的商品化細(xì)胞解離液，核心特點(diǎn)：
– 復(fù)合酶體系，溫和分解細(xì)胞與培養(yǎng)皿之間的粘附結(jié)構(gòu)，短時(shí)間完成細(xì)胞脫附，減少長(zhǎng)時(shí)間酶解帶來(lái)的細(xì)胞凋亡。
– 無(wú)動(dòng)物源組分，減少外源蛋白干擾，適合細(xì)胞表面標(biāo)志物分析、單細(xì)胞測(cè)序前樣本制備。
– 無(wú)菌過(guò)濾、低內(nèi)毒素，批次穩(wěn)定性好，不同批次之間酶活波動(dòng)小，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性佳。
– 溶劑為無(wú)鈣鎂 DPBS，體系穩(wěn)定，解凍后直接使用，無(wú)需額外調(diào)配。
– 適用細(xì)胞種類豐富，覆蓋各類腫瘤細(xì)胞系、干細(xì)胞、原代分離細(xì)胞。
?三、對(duì)比傳統(tǒng)胰酶，有哪些差異化優(yōu)勢(shì)
常規(guī)胰酶消化力度強(qiáng)，容易破壞細(xì)胞膜表面抗原，對(duì)于干細(xì)胞、原代細(xì)胞容易造成大量細(xì)胞死亡；部分實(shí)驗(yàn)還需要血清或胰酶抑制劑終止反應(yīng)，增加操作步驟。
Accutase? A6964 配方更柔和，細(xì)胞損傷更低，保留表面標(biāo)記，很多場(chǎng)景不用終止反應(yīng)，在流式、單細(xì)胞樣本制備中優(yōu)勢(shì)明顯，是很多高分文獻(xiàn)里常用的解離試劑。
A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液說(shuō)明
General description
憑借有效的作用和對(duì)不同類型細(xì)胞的耐受性以及血清誘導(dǎo)的中和作用，胰蛋白酶可用于組織解離。
Application
來(lái)自豬胰腺的胰蛋白酶已被用于消化雞骨頭。它還被用于分離黃體內(nèi)皮細(xì)胞。。
對(duì)于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例約為1:100至1:20。本品的典型用途是使貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)表面脫落。 使細(xì)胞解離所需的胰蛋白酶濃度主要取決于細(xì)胞類型和培養(yǎng)物代數(shù)。 Trypsins也被用于細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)胞再懸浮，在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中用于蛋白質(zhì)的消化，以及在各種凝膠消化中。 其他的應(yīng)用包括通過(guò)基于膜的技術(shù)評(píng)估結(jié)晶，以及在一項(xiàng)研究中確定蛋白質(zhì)折疊速率和產(chǎn)量可以被動(dòng)力學(xué)陷阱的存在所限制。
Biochem/physiol Actions
胰蛋白酶可切割賴氨酸和精氨酸殘基的C末端肽段。 如果酸性殘基位于切割位點(diǎn)的任意一側(cè)，則該反應(yīng)的水解速度減慢，并且如果脯氨酸殘基位于切割位點(diǎn)的羧基側(cè)，則水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH條件為7-9。 胰蛋白酶還可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺鍵。 將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，用于中和鈣離子和鎂離子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除這些離子會(huì)增加酶活性。
絲氨酸蛋白酶抑制劑（包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等）會(huì)抑制胰蛋白酶。
Preparation Note
本品為凍干粉，可以25mg/mL溶于Hank′s平衡鹽溶液。
對(duì)于需要EDTA的應(yīng)用，溶解胰蛋白酶應(yīng)該使用不含Ca2+ 或 Mg2+的緩沖鹽溶液.
Other Notes
一個(gè)BAEE單位以BAEE作為底物，在25°C、pH 7.6條件下每分鐘每毫升產(chǎn)生0.001的ΔA253 。一個(gè)BTEE單位=320個(gè)ATEE單位。反應(yīng)體積=3.2mL（1cm的光徑）。
胰蛋白酶是由含223個(gè)氨基酸殘基的單鏈多肽組成的，它通過(guò)切割胰蛋白酶原的Lys-1le肽鍵以去除N-末端六肽而獲得。 氨基酸序列通過(guò)6個(gè)二硫鍵交聯(lián)。 這是天然形式的胰蛋白酶——β-胰蛋白酶。 β-胰蛋白酶可以自溶，在Lys-Ser殘基處斷裂，產(chǎn)生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶家族的成員。
Disclaimer
溶于1mM HCl的溶液分裝后可在-20℃穩(wěn)定保存1年。Ca2+ 的存在也會(huì)降低胰蛋白酶的自水解性，保持其在溶液中的穩(wěn)定性。 胰蛋白酶也將在2.0 M尿素、2.0 M鹽酸胍或0.1% (w/v) SDS中保持大部分活性。
?四、華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨保障，冷鏈配送
華雅思創(chuàng)專注進(jìn)口生物試劑、細(xì)胞培養(yǎng)耗材供應(yīng)，Merck-Sigma A6964-100ML Accutase? 溶液庫(kù)存充足，支持冷鏈干冰發(fā)貨，可提供產(chǎn)品相關(guān)資質(zhì)文件?？蒲袡C(jī)構(gòu)、生物企業(yè)可批量采購(gòu)，避免試劑斷貨耽誤細(xì)胞傳代與樣本制備工作。
細(xì)胞解離試劑選型，細(xì)胞活性、組分純度、批次穩(wěn)定性是核心考量。A6964-100ML Merck-Sigma Accutase? 溶液適合對(duì)細(xì)胞保護(hù)要求高的實(shí)驗(yàn)，華雅思創(chuàng)現(xiàn)貨供應(yīng)，是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室采購(gòu)的可靠選擇。
