名稱：T4799-10G Merck-Sigma 胰蛋白酶（來源于豬胰腺）

貨號：T4799-10G

品牌：Merck-Sigma

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產(chǎn)品說明

General description

憑借有效的作用和對不同類型細(xì)胞的耐受性以及血清誘導(dǎo)的中和作用，胰蛋白酶可用于組織解離。

Application

來自豬胰腺的胰蛋白酶已被用于消化雞骨頭。它還被用于分離黃體內(nèi)皮細(xì)胞。。

對于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例約為1:100至1:20。本品的典型用途是使貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)表面脫落。 使細(xì)胞解離所需的胰蛋白酶濃度主要取決于細(xì)胞類型和培養(yǎng)物代數(shù)。 Trypsins也被用于細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)胞再懸浮，在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中用于蛋白質(zhì)的消化，以及在各種凝膠消化中。 其他的應(yīng)用包括通過基于膜的技術(shù)評估結(jié)晶，以及在一項(xiàng)研究中確定蛋白質(zhì)折疊速率和產(chǎn)量可以被動力學(xué)陷阱的存在所限制。

Biochem/physiol Actions

胰蛋白酶可切割賴氨酸和精氨酸殘基的C末端肽段。 如果酸性殘基位于切割位點(diǎn)的任意一側(cè)，則該反應(yīng)的水解速度減慢，并且如果脯氨酸殘基位于切割位點(diǎn)的羧基側(cè)，則水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH條件為7-9。 胰蛋白酶還可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺鍵。 將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，用于中和鈣離子和鎂離子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除這些離子會增加酶活性。

絲氨酸蛋白酶抑制劑（包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等）會抑制胰蛋白酶。

Preparation Note

本品為凍干粉，可以25mg/mL溶于Hank′s平衡鹽溶液。

對于需要EDTA的應(yīng)用，溶解胰蛋白酶應(yīng)該使用不含Ca2+ 或 Mg2+的緩沖鹽溶液.

Other Notes

一個(gè)BAEE單位以BAEE作為底物，在25°C、pH 7.6條件下每分鐘每毫升產(chǎn)生0.001的ΔA253 。一個(gè)BTEE單位=320個(gè)ATEE單位。反應(yīng)體積=3.2mL（1cm的光徑）。

胰蛋白酶是由含223個(gè)氨基酸殘基的單鏈多肽組成的，它通過切割胰蛋白酶原的Lys-1le肽鍵以去除N-末端六肽而獲得。 氨基酸序列通過6個(gè)二硫鍵交聯(lián)。 這是天然形式的胰蛋白酶——β-胰蛋白酶。 β-胰蛋白酶可以自溶，在Lys-Ser殘基處斷裂，產(chǎn)生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶家族的成員。

Disclaimer

溶于1mM HCl的溶液分裝后可在-20℃穩(wěn)定保存1年。Ca2+ 的存在也會降低胰蛋白酶的自水解性，保持其在溶液中的穩(wěn)定性。 胰蛋白酶也將在2.0 M尿素、2.0 M鹽酸胍或0.1% (w/v) SDS中保持大部分活性。