G418簡(jiǎn)介

G418（又稱Geneticin，遺傳霉素）是一種氨基糖苷類抗生素，氨基糖苷類藥物與核糖體不可逆地結(jié)合，并通過(guò)破壞其校對(duì)能力導(dǎo)致翻譯提前終止或錯(cuò)譯，從而抑制蛋白質(zhì)合成，阻止敏感

細(xì)胞的生長(zhǎng)。G418對(duì)需氧和兼性需氧革蘭氏陰性桿菌、一些革蘭氏陽(yáng)性菌以及真核細(xì)胞均具有氨基糖苷類毒性。因而常被用于篩選表達(dá)氨基糖苷類修飾酶的細(xì)胞株。

G418的結(jié)構(gòu)中包含雙堿基環(huán)醇和2-脫氧鏈霉胺，它們通過(guò)糖苷鍵與氨基糖連接。G418的結(jié)構(gòu)獨(dú)特性源于 C-6 位置的羥基功能而不是氨基功能。這種差異使其能與80S核糖體復(fù)合物特異性結(jié)合，與其他非特異性結(jié)合真核細(xì)胞核糖體的氨基糖苷類藥物相比，G418 抑制真核細(xì)胞蛋白合成的作用更強(qiáng)。而氨基糖苷類修飾酶，即氨基糖苷類磷酸轉(zhuǎn)移酶（APH），可共價(jià)修飾抗生素（如G418）的氨基或羥基功能，削弱藥物-核糖體的相互作用，從而妨礙G418發(fā)揮功能，即表現(xiàn)為耐藥的效果。

作用機(jī)制

G418的結(jié)構(gòu)中含有雙堿基環(huán)醇和2-脫氧鏈霉胺，這些結(jié)構(gòu)通過(guò)糖苷鍵與氨基糖連接。G418的獨(dú)特性來(lái)源于其C-6位置的羥基功能，而非氨基功能。這種結(jié)構(gòu)上的差異使得G418能夠與80S核糖體復(fù)合物特異性結(jié)合，相較于其他氨基糖苷類藥物，G418對(duì)真核細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的抑制作用更為顯著。

篩選應(yīng)用

G418常被用于篩選表達(dá)氨基糖苷類修飾酶的細(xì)胞株。這些修飾酶，如氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶（APH），能夠共價(jià)修飾G418的氨基或羥基功能，削弱藥物與核糖體的相互作用，從而產(chǎn)生耐藥效果。當(dāng)真核細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染新霉素抗性基因后，它們能夠高效表達(dá)氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶，獲得在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的能力。

推薦使用濃度

G418作為真核翻譯抑制劑的推薦篩選濃度范圍為100-800 μg/mL。然而，有效的殺傷濃度會(huì)因細(xì)胞類型、培養(yǎng)基、生長(zhǎng)條件等多種因素而異。因此，為了確保篩選的成功，建議通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定每個(gè)特定培養(yǎng)系統(tǒng)的工作濃度。

康寧廠家介紹

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