HiFi 熱啟動高保真DNA聚合酶應(yīng)用

用于常規(guī)測序的PCR（直接測序或克隆PCR產(chǎn)物的測序）

新一代測序文庫擴(kuò)增（與KAPA文庫擴(kuò)增方案配合使用時）

擴(kuò)增片段DNA用于克隆和蛋白質(zhì)表達(dá)或基因組表征

定點(diǎn)突變

KAPA HiFi DNA聚合酶擴(kuò)增特點(diǎn)

高DNA親和力，無需輔助蛋白和DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域

高持續(xù)合成能力

長片段擴(kuò)增能力

選擇失活，低非特異性擴(kuò)增

KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶是一種新型B家族DNA聚合酶，經(jīng)過工程改造后對DNA的親和力增加，不需要輔助蛋白或DNA結(jié)合域。與野生型B家族DNA聚合酶相比，該酶固有的高持續(xù)合成能力可顯著提高合成產(chǎn)量，速度和靈敏度。此外，擴(kuò)增長片段以及富含GC和AT片段的能力顯著提高。該酶與特有抗體結(jié)合，*次變性步驟之前可以保持失活狀態(tài)。這可以防止反應(yīng)過程中的非特異性擴(kuò)增，提高靈敏度，并提高反應(yīng)效率。

組份（除引物和模板的擴(kuò)增反應(yīng)液）

DNA聚合酶+緩沖液混合

— DNA聚合酶：0.5U /25μL反應(yīng)

— 緩沖液：dNTPs（每種dNTP 0.3mM，1X），MgCl₂（2.5mM，1X ）和穩(wěn)定劑

KAPA HiFi高保真DNA聚合酶技術(shù)參數(shù)

聚合酶種類：改造B族DNA聚合酶

聚合酶活性：KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶具有5’g3’聚合酶和3’g5’核酸外切酶（proofreading）活性，但沒有5’g3’核酸外切酶活性。

擴(kuò)增片段長度：可從基因組DNA中擴(kuò)增高達(dá)15kb的目標(biāo)或從較不復(fù)雜的目標(biāo)擴(kuò)增20kb。

KAPA HiFi高保真DNA聚合酶預(yù)混液設(shè)計(jì)用于各種目標(biāo)和大小片段的常規(guī)高保真PCR。它的錯誤率比野生型Taq DNA聚合酶低約100倍，成功率和產(chǎn)率比野生型B家族（proofreading）DNA聚合酶更高。另外，KAPA HiFi HotStart比野生型B家族DNA聚合酶需要更短的反應(yīng)時間。 KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶具有5’g3’聚合酶和3’g5’核酸外切酶（proofreading）活性，但沒有5’g3’核酸外切酶活性。