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在神經(jīng)科學(xué)研究中,如何準(zhǔn)確識(shí)別和標(biāo)記成熟神經(jīng)元,是理解神經(jīng)發(fā)育、環(huán)路功能及相關(guān)疾病機(jī)制的核心環(huán)節(jié)。NeuN(Neuronal Nuclei,神經(jīng)元核蛋白)作為一種DNA結(jié)合的神經(jīng)元特異性蛋白,廣泛表達(dá)于中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的大多數(shù)成熟神經(jīng)元中,是區(qū)分神經(jīng)元與非神經(jīng)元細(xì)胞最具代表性的標(biāo)志物。Merck-millipore 的 MAB377 抗NeuN抗體(克隆號(hào) A60),正是這一領(lǐng)域應(yīng)用最廣泛、驗(yàn)證最充分的經(jīng)典工具。
一、產(chǎn)品概述
MAB377 是 Chemicon? 品牌旗下的一款小鼠單克隆抗NeuN抗體,克隆號(hào)為 A60,以純化免疫球蛋白形式提供。該抗體可特異性識(shí)別DNA結(jié)合的神經(jīng)元特異性蛋白NeuN,存在于所有被測(cè)脊椎動(dòng)物的大多數(shù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元細(xì)胞中。MAB377 已發(fā)表并經(jīng)驗(yàn)證可用于流式細(xì)胞術(shù)(FC)、免疫細(xì)胞化學(xué)(IC)、免疫熒光(IF)、免疫組織化學(xué)(IH)、石蠟包埋組織免疫組化(IH(P))、免疫沉淀(IP)以及Western Blot(WB)等多種實(shí)驗(yàn)技術(shù),是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域引用量極高的抗體之一,文獻(xiàn)引用超過(guò)2500篇。
該產(chǎn)品僅供研究使用,不適用于人體或診斷用途。
二、核心參數(shù)
| 參數(shù) | 規(guī)格 |
|---|---|
| 產(chǎn)品貨號(hào) | MAB377 |
| 產(chǎn)品名稱(chēng) | Anti-NeuN Antibody, clone A60 |
| 品牌 | Merck-millipore(Chemicon?) |
| 克隆號(hào) | A60 |
| 宿主 | 小鼠 |
| 抗體類(lèi)型 | 單克隆抗體 |
| 免疫球蛋白亞型 | IgG1 |
| 抗體形式 | 純化免疫球蛋白(Protein A純化) |
| 免疫原 | 純化的小鼠腦細(xì)胞核 |
| 分子量 | 46/48 kDa |
| 種屬反應(yīng)性 | 禽、雞、雪貂、人、小鼠、豬、大鼠、蠑螈 |
| 應(yīng)用 | FC、IC、IF、IH、IH(P)、IP、WB |
| 濃度 | 1 mg/mL |
| 儲(chǔ)存溫度 | 2-8°C |
| 運(yùn)輸條件 | 濕冰運(yùn)輸 |
| RRID | AB_2298772 |
三、靶點(diǎn)概述:NeuN的生物學(xué)功能
NeuN 是一種DNA結(jié)合的神經(jīng)元特異性核蛋白,其分布明顯局限于胎兒和成人大腦中的神經(jīng)元細(xì)胞核、核周體以及部分近端神經(jīng)元突起。免疫組化染色主要位于神經(jīng)元細(xì)胞核,細(xì)胞質(zhì)染色較淺。強(qiáng)核染色提示NeuN可能具有核調(diào)節(jié)蛋白的功能。
值得注意的是,有少數(shù)神經(jīng)元類(lèi)型在所有年齡段均不被NeuN識(shí)別,包括:INL視網(wǎng)膜細(xì)胞、Cajal-Retzius細(xì)胞、浦肯野細(xì)胞、下橄欖核和齒狀核神經(jīng)元以及交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞等。在發(fā)育過(guò)程中,NeuN的免疫反應(yīng)性首先在神經(jīng)元發(fā)生有絲分裂后不久即可觀察到,增殖區(qū)未觀察到染色。免疫反應(yīng)性在小鼠神經(jīng)管中約E9.5時(shí)出現(xiàn),至E12.5時(shí)廣泛分布于發(fā)育中的神經(jīng)系統(tǒng)。
四、技術(shù)驗(yàn)證與數(shù)據(jù)
Western Blot 驗(yàn)證
該抗體在Western Blot中可識(shí)別46-48 kDa范圍內(nèi)的2-3個(gè)條帶,可能在約66 kDa處識(shí)別出另一條帶。已有敲除驗(yàn)證數(shù)據(jù)支持其特異性。
免疫組化驗(yàn)證
在免疫組化應(yīng)用中,推薦稀釋度為1:100-1:1,000。該抗體在聚酯蠟包埋組織上效果最佳,在石蠟包埋組織上以較低工作稀釋度同樣適用。該抗體與甲醛類(lèi)固定劑兼容性良好,檸檬酸和微波預(yù)處理已成功應(yīng)用。有獨(dú)立驗(yàn)證數(shù)據(jù)顯示,該抗體在IHC中功能良好,已在人類(lèi)和動(dòng)物組織中驗(yàn)證有效。
免疫細(xì)胞化學(xué)驗(yàn)證
在免疫細(xì)胞化學(xué)中,推薦使用1:10-1:100稀釋度。培養(yǎng)的神經(jīng)元應(yīng)使用0.1% Triton X-100進(jìn)行透化處理。
文獻(xiàn)引用
該抗體在開(kāi)放獲取文獻(xiàn)中已被提及超過(guò)1270次,總引用量超過(guò)2500篇。近期應(yīng)用包括氫氣促進(jìn)新生兒缺氧缺血性腦損傷神經(jīng)保護(hù)研究、Raf-ERK信號(hào)動(dòng)態(tài)調(diào)控神經(jīng)元活動(dòng)研究以及小膠質(zhì)細(xì)胞VRK2調(diào)控丘腦星形膠質(zhì)細(xì)胞GABA合成研究等。
五、適用研究領(lǐng)域
MAB377 抗NeuN抗體適用于以下研究方向:
神經(jīng)元鑒定與標(biāo)記:成熟神經(jīng)元的特異性識(shí)別,適用于中樞和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)各腦區(qū)
神經(jīng)發(fā)育研究:神經(jīng)元分化、成熟及遷移過(guò)程的研究
神經(jīng)環(huán)路與突觸研究:腦區(qū)神經(jīng)元定位及環(huán)路示蹤
神經(jīng)退行性疾?。喊柎暮D?、帕金森病等疾病模型中神經(jīng)元丟失的評(píng)估
腦損傷與修復(fù):創(chuàng)傷性腦損傷、腦缺血后神經(jīng)元存活分析
脊髓損傷研究:脊髓神經(jīng)元標(biāo)記及損傷后修復(fù)評(píng)估
神經(jīng)移植研究:移植物中神經(jīng)元細(xì)胞的鑒定與追蹤
原代神經(jīng)元培養(yǎng):體外培養(yǎng)神經(jīng)元的鑒定與純度評(píng)估
六、使用說(shuō)明
儲(chǔ)存與處理:
收到產(chǎn)品后于 2-8°C 儲(chǔ)存
自收之日起,2-8°C條件下可穩(wěn)定保存 6個(gè)月
產(chǎn)品為純化小鼠免疫球蛋白IgG1液體,緩沖液含0.02 M磷酸鹽緩沖液、0.25 M NaCl,pH 7.6,含0.1%疊氮化鈉
推薦工作稀釋度:
| 應(yīng)用 | 推薦稀釋度 |
|---|---|
| Western Blot | 前一批次識(shí)別46-48 kDa范圍內(nèi)2-3個(gè)條帶 |
| 免疫細(xì)胞化學(xué)(IC) | 1:10 – 1:100 |
| 免疫組織化學(xué)(IH) | 1:100 – 1:1,000 |
| 免疫組化(石蠟切片) | 前一批次已驗(yàn)證,最佳稀釋度由用戶(hù)確定 |
| 免疫熒光(IF) | 1:500(參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)) |
最佳工作稀釋度需由最終用戶(hù)根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化確定。
陽(yáng)性對(duì)照:腦組織。
陰性對(duì)照:非神經(jīng)元組織,如成纖維細(xì)胞。
注意事項(xiàng):
培養(yǎng)的神經(jīng)元應(yīng)使用0.1% Triton X-100進(jìn)行透化處理
一抗稀釋?xiě)?yīng)使用僅含緩沖液和一抗的簡(jiǎn)單溶液,不含過(guò)多蛋白封閉劑或洗滌劑
雙標(biāo)記研究中如使用小鼠單克隆抗體,建議順序孵育,MAB377最后加入
七、產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
? 經(jīng)典克隆,驗(yàn)證充分
克隆號(hào) A60 是NeuN抗體領(lǐng)域唯一的經(jīng)典克隆,自報(bào)道以來(lái)已在超過(guò)2500篇文獻(xiàn)中得到驗(yàn)證,具有卓越的特異性和重復(fù)性。該抗體已在流式細(xì)胞術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、免疫組化、免疫沉淀和Western Blot等多種平臺(tái)驗(yàn)證。
? 種屬覆蓋廣泛
可識(shí)別禽、雞、雪貂、人、小鼠、豬、大鼠、蠑螈等多種屬的NeuN蛋白,為跨物種比較研究提供了便利。
? 多平臺(tái)兼容
同時(shí)適用于流式細(xì)胞術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、免疫組織化學(xué)(包括石蠟切片和冰凍切片)、免疫沉淀和Western Blot,可滿(mǎn)足不同實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的需求。
? 獨(dú)立驗(yàn)證支持
該抗體已通過(guò)紐約大學(xué)Langone醫(yī)學(xué)中心的獨(dú)立驗(yàn)證,確認(rèn)在人類(lèi)和動(dòng)物組織中IHC功能良好。
? 文獻(xiàn)基礎(chǔ)深厚
超過(guò)2500篇同行評(píng)審文獻(xiàn)引用,涵蓋神經(jīng)科學(xué)研究的各個(gè)方向,為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性提供了堅(jiān)實(shí)保障。
MAB377 抗NeuN抗體以其經(jīng)典克隆 A60 的卓越特異性、廣泛的種屬覆蓋和豐富的文獻(xiàn)驗(yàn)證,成為神經(jīng)科學(xué)研究中成熟神經(jīng)元標(biāo)記的可靠選擇。
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