摘要

細(xì)胞-基質(zhì)間的黏附互作是調(diào)控細(xì)胞存活、鋪展、遷移、分化及信號傳導(dǎo)的核心前提。在原代細(xì)胞、干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等難養(yǎng)型細(xì)胞培養(yǎng)體系中，單純 TC?處理培養(yǎng)板往往不足以支撐細(xì)胞高效貼壁，極易出現(xiàn)細(xì)胞漂浮、凋亡、分化異常等實(shí)驗(yàn)瓶頸。

Corning 人源纖維連接蛋白（Fibronectin，貨號：354008?1mg、356008?5mg）作為經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)控的天然人血漿來源胞外基質(zhì)蛋白，可通過 RGD?整合素信號通路構(gòu)建仿生培養(yǎng)界面，顯著改善貼壁依賴性細(xì)胞的培養(yǎng)效果，現(xiàn)已成為無血清培養(yǎng)、細(xì)胞遷移侵襲、組織工程等方向的主流工具試劑。華雅思創(chuàng)生物現(xiàn)貨供應(yīng)兩款規(guī)格，可滿足預(yù)實(shí)驗(yàn)及大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)的不同需求。

1、分子生物學(xué)背景與作用機(jī)制

纖維連接蛋白 (FN) 是一種高分子量二聚體糖蛋白，非還原條件下分子量約 440?kDa，分子結(jié)構(gòu)包含多個獨(dú)立功能域，可分別結(jié)合整合素受體、膠原蛋白、肝素、纖溶蛋白等靶點(diǎn)。其中經(jīng)典 RGD 三肽序列是介導(dǎo)細(xì)胞?蛋白黏附的核心位點(diǎn)，與細(xì)胞膜表面整合素受體 α5β1 特異性結(jié)合后，可激活下游 FAK?Src 信號軸，啟動黏著斑組裝，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞骨架重構(gòu)、細(xì)胞鋪展與增殖周期啟動。

相較于動物源纖連蛋白，人血漿來源的 Corning Fibronectin 在人源細(xì)胞體系中擁有更高的受體親和性，可降低異種蛋白帶來的非特異性激活風(fēng)險，更加適配干細(xì)胞誘導(dǎo)分化、類器官培養(yǎng)、內(nèi)皮細(xì)胞功能學(xué)研究等對培養(yǎng)體系成分要求嚴(yán)苛的科研場景。

2、產(chǎn)品質(zhì)控體系與關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)

Corning 354008（1mg）、356008（5mg）兩款纖連蛋白產(chǎn)品，均源自人血漿原料，原材料經(jīng)過乙肝表面抗原、HIV?1 抗體篩查，從源頭規(guī)避血源病原體風(fēng)險。

蛋白純度：≥90%（SDS?PAGE 電泳鑒定）

劑型：CAPS 緩沖體系凍干粉末（含 NaCl、CaCl?，pH?11.0）

生物學(xué)活性：每批次均開展 BHK?21 細(xì)胞附著?鋪展功能性驗(yàn)證，保證蛋白空間構(gòu)象與生物活性

微生物質(zhì)控：細(xì)菌、真菌、支原體檢測陰性，杜絕外源污染干擾細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

推薦工作方案：

培養(yǎng)表面包被：包被濃度 1?5?μg/cm2；

培養(yǎng)基直接添加：終濃度 5?μg/mL；

復(fù)溶建議：無菌超純水復(fù)溶至 1?mg/mL，避免反復(fù)凍融；

儲存穩(wěn)定性：凍干粉末 2?8℃保存；復(fù)溶分裝后?20℃避光儲存，建議 6 個月內(nèi)用完，減少蛋白活性衰減風(fēng)險。

3、主流應(yīng)用場景與實(shí)驗(yàn)解決方案

3.1 難養(yǎng)型原代細(xì)胞與干細(xì)胞培養(yǎng)

原代內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞普遍存在貼壁效率低的問題。采用纖連蛋白對培養(yǎng)器皿進(jìn)行預(yù)包被，可大幅提升細(xì)胞初始貼壁率，降低無血清、低血清培養(yǎng)條件下細(xì)胞凋亡比例，維持干細(xì)胞干性，減少自發(fā)分化。

3.2 細(xì)胞遷移、侵襲與傷口愈合模型

FN 包被基底能夠構(gòu)建趨化底物界面，常用于 Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)，研究腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞的遷移能力及相關(guān)信號通路調(diào)控機(jī)制。

3.3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞株與基因編輯細(xì)胞的培養(yǎng)優(yōu)化

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后的細(xì)胞常出現(xiàn)貼壁能力下降。纖連蛋白包被基底可改善轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活狀態(tài)，提升穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選成功率，適合 COS?7、NIH?3T3、HeLa 等工程化細(xì)胞培養(yǎng)。

3.4 組織工程、類器官與 2D/3D 仿生微環(huán)境構(gòu)建

可與膠原蛋白、層粘連蛋白等基質(zhì)復(fù)配，用于構(gòu)建復(fù)合胞外基質(zhì)支架，模擬體內(nèi)細(xì)胞外微環(huán)境，應(yīng)用于血管再生、創(chuàng)面修復(fù)機(jī)制、腫瘤微環(huán)境體外模型研究。

4、規(guī)格選型指南

354008（1mg）：適合課題預(yù)實(shí)驗(yàn)、條件摸索、小樣本細(xì)胞功能驗(yàn)證，用量少、靈活度高，適合初期方法學(xué)建立；

356008（5mg）：適合長期大批量實(shí)驗(yàn)、高通量篩選、干細(xì)胞規(guī)模化擴(kuò)增、平臺化項(xiàng)目，單瓶采購性價比更高，適合實(shí)驗(yàn)室常備儲備。

溫馨提示：兩款產(chǎn)品蛋白品質(zhì)、純度、生物學(xué)活性完全一致，僅灌裝規(guī)格不同。

結(jié)語

胞外基質(zhì)蛋白是搭建體外仿生細(xì)胞微環(huán)境不可或缺的一環(huán)，Corning 人纖維連接蛋白憑借穩(wěn)定的批次活性、成熟的實(shí)驗(yàn)方案、嚴(yán)格的安全質(zhì)控，成為貼壁細(xì)胞培養(yǎng)優(yōu)化領(lǐng)域公認(rèn)的高可靠性試劑。華雅思創(chuàng)生物現(xiàn)貨供應(yīng) Corning 354008（1mg）、356008（5mg）人纖維連接蛋白，可提供原廠 COA 質(zhì)檢報告，縮短試劑采購周期，保障細(xì)胞培養(yǎng)項(xiàng)目順利推進(jìn)。