在癌癥治療的前沿領域，CAR-T/TCR-T 免疫細胞治療技術正以前所未有的速度發(fā)展，為眾多癌癥患者帶來新的希望。從實驗室研究到臨床應用，這一技術背后有著復雜而精密的技術路線。今天讓我們一同深入了解 CAR-T/TCR-T 免疫細胞治療技術的奧秘。

CAR-T/TCR-T 技術概述

CAR-T 和 TCR-T 免疫細胞治療的核心在于激活和增強患者自身的免疫系統(tǒng)來對抗癌癥。在 CAR-T 治療中，醫(yī)生首先從患者體內(nèi)提取 T 細胞，這些細胞被稱為 “免疫戰(zhàn)士”。隨后，通過基因工程技術，為這些 T 細胞裝備上特殊導航 —— 嵌合抗原受體（CAR），使它們能夠精準識別并鎖定腫瘤細胞表面的特定抗原。經(jīng)過大量擴增后，這些改造升級的 CAR-T 細胞被重新注入患者體內(nèi)，迅速發(fā)動對腫瘤細胞的精準攻擊，展現(xiàn)出強大的抗癌能力。

TCR-T 治療則另辟蹊徑，它聚焦于改造 T 細胞的 T 細胞受體（TCR）。TCR 是 T 細胞表面用于識別抗原的受體，TCR-T 技術通過基因編輯等手段，使 TCR 能夠識別腫瘤細胞內(nèi)部的特異性抗原肽 – MHC 復合物，從而激活 T 細胞的殺傷功能，對腫瘤細胞實施精準打擊，尤其在應對某些隱藏在細胞內(nèi)部抗原的腫瘤方面具有獨特優(yōu)勢。

前期準備：目標細胞的獲取與激活

一切從獲取患者的免疫細胞開始，通常是采集外周血中的單個核細胞PBMC，其中包含了 T 細胞。為了確保后續(xù)改造的順利進行，細胞的純度和活性至關重要，需要經(jīng)過一系列精細的分離和純化步驟。獲取細胞后，激活 T細胞是關鍵的一步。常用的方法包括使用抗 CD3 和抗 CD28 單克隆抗體模擬 T 細胞受體和共刺激信號，或者利用特定的激活因子刺激 T 細胞表面的受體，使 T 細胞從相對靜止的狀態(tài)進入激活狀態(tài)，打開它們的增殖和功能激活開關，細胞體積增大、開始快速分裂，同時表面分子表達發(fā)生變化，為接下來的基因改造做好充分準備。

基因改造：為免疫細胞裝備精準武器

1. 慢病毒轉導系統(tǒng)：高效基因傳遞的利器

在基因改造環(huán)節(jié)，慢病毒轉導系統(tǒng)是常用的工具之一。慢病毒載體經(jīng)過精心設計，能夠將攜帶 CAR 或 TCR 基因的遺傳物質高效地傳遞到 T 細胞內(nèi)部。然而，傳統(tǒng)的慢病毒轉導存在效率瓶頸，轉導效率的高低直接決定了成功改造的 T 細胞數(shù)量，進而影響治療效果。

LentiBOOST?—Pharma grade?產(chǎn)品的出現(xiàn)為這一環(huán)節(jié)帶來了突破。它可以顯著提高慢病毒轉導效率至90%，使更多 T 細胞能夠成功獲得 CAR 或 TCR 基因。而且，它還能增加每個細胞的可滴定載體拷貝數(shù)，減少慢病毒載體的使用量，降低了生產(chǎn)成本。其 “即插即用” 的特性，無培養(yǎng)器皿包被要求，能快速整合到現(xiàn)有的轉導方案中，大大提高了實驗操作的便捷性和效率，可提供醫(yī)藥級用于科研，GMP級用于臨床應用，助力科研工作者和企業(yè)加速推進 CAR-T/TCR-T 產(chǎn)品的研發(fā)進程。

2. 基因編輯技術：精準優(yōu)化免疫細胞

除了慢病毒轉導引入外源基因，基因編輯技術如 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)在 CAR-T/TCR-T 治療中也發(fā)揮著重要作用。通過基因編輯，可以對 T 細胞自身的基因進行精準改造，例如敲除可能引發(fā)免疫排斥的特定基因，使改造后的 T 細胞在患者體內(nèi)的存活時間和功能發(fā)揮更加持久和穩(wěn)定；或者優(yōu)化 T 細胞的信號通路相關基因，增強其對腫瘤細胞的殺傷能力。

Invitrogen A36499 TrueCut Cas9 蛋白 v2?是基因編輯過程中的一大利器。作為一種重組的釀膿性鏈球菌 Cas9（野生型）蛋白，它與向導 RNA（gRNA）能形成非常穩(wěn)定的核糖核蛋白（RNP）復合物，這種穩(wěn)定性對于基因編輯的精準性和效率至關重要。核定位信號（NLS）的引入更是如虎添翼，幫助 Cas9 蛋白順利入核，增加了基因組 DNA 切割的幾率，從而提高了基因編輯的成功率。同時，它可以直接通過脂質體介導轉染試劑或電穿孔進行轉染，省去了耗時的克隆步驟，大大縮短了基因編輯的時間周期，為快速高效的免疫細胞改造提供了有力支持。

細胞擴增：打造規(guī)?；目拱┸婈?/strong>

成功改造后的 T 細胞數(shù)量相對有限，需要進行大規(guī)模的擴增才能滿足回輸?shù)交颊唧w內(nèi)治療的需求。細胞擴增過程需要提供適宜的培養(yǎng)環(huán)境，包括營養(yǎng)物質、細胞因子以及適當?shù)拇碳ば盘柕?，以確保細胞的快速增殖和維持良好的活性。

Gibco A2596101 CTS? 免疫細胞血清替代物（SR）在這一環(huán)節(jié)發(fā)揮著關鍵作用。它設計用于添加到基礎細胞培養(yǎng)基中，具有成分明確且無異種成分的優(yōu)勢，不含?；蚱渌侨藙游镌葱越M分，從而盡可能降低了與人血清相關的供應和安全風險。它能夠支持多克隆 T 細胞的擴增，無論是通過 CD3/CD28 微珠活化、OKT3 mAb 活化，還是病毒特異性和腫瘤特異性 T 細胞的擴增都能勝任。并且，它對 T 細胞表型（CD4、CD8 和 CD62L）的支持作用可媲美人血清，同時支持基因修飾 CAR T 細胞（慢病毒轉導）的擴增，減少了與驗證人血清相關的成本和時間，具有足夠的通用性，可配合多種基礎培養(yǎng)基使用，為細胞擴增提供了穩(wěn)定可靠的營養(yǎng)支持，確保了擴增后細胞的質量和功能。

質量控制與檢測

在細胞回輸?shù)交颊唧w內(nèi)之前，嚴格的質量控制與檢測是必不可少的。這包括對細胞的數(shù)量、活性、表型、基因編輯成功率以及是否存在污染等多個方面的評估檢測。

對于病毒載體相關的檢測，Cell Biolabs VPK-120 逆轉錄病毒快速定量試劑盒提供了快速準確的解決方案。它能在?45 – 60 分鐘內(nèi)快速完成病毒滴度的定量檢測，采用熒光法檢測病毒核酸濃度，無論是純化前還是純化后的樣品都能進行檢測，靈敏度高達 1.5×10⁹個病毒顆粒/mL，100μL逆轉錄病毒上清。通過精準檢測病毒滴度，可以確保病毒載體在生產(chǎn)過程中的質量符合要求，為后續(xù)的細胞改造和治療提供可靠保障，有助于及時發(fā)現(xiàn)和排除潛在的生產(chǎn)問題，保證整個 CAR-T/TCR-T 制備工藝的質量穩(wěn)定性。

細胞回輸：從實驗室到臨床的關鍵跨越

在患者體內(nèi)，這些經(jīng)過改造的 CAR-T/TCR-T 細胞開始執(zhí)行它們的使命。它們會迅速識別并結合腫瘤細胞表面或內(nèi)部的特定抗原，激活免疫反應，釋放細胞毒性物質，精準殺傷腫瘤細胞。同時，它們還能在體內(nèi)持續(xù)存活一段時間，對腫瘤細胞保持監(jiān)視，防止腫瘤復發(fā)。

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